تخلیص و ارزیابی hbeag نوترکیب به همراه بر چسب هیستیدینی با ساختار فیزیولوژیک طبیعی، به دنبال کلونینگ و بیان آن در e.coli
نویسندگان
چکیده
آلودگی به ویروس هپاتیت (hbv) b یکی از مسایل بهداشت جهانی است به طوری که در حال حاضر حدود 360 میلیون نفر در ایران به این ویروس آلوده اند. در میان آنتی ژنهای این ویروس، عملکرد فیزیولوژیک hbeag مثبت حضور این آنتی ژن بعنوان مارکر تکثیر ویروس در نظر گرفته می شود و احتمالا در پاتوژنز و پایداری بیماری نقش دارد در حالیکه در بیماران hbeag منفی، تفاوت قابل ملاحظه ای در سیر بالینی بیماری مشاهده نشده است. در حال حاضر دسترسی به مقادیر زیاد این آنتی ژن جهت کاربردهای تحقیقی و تشخیصی با استفاده از بیان این آنتی ژن بصورت نوترکیب در سیستمهای بیانی مختلف، مسیر گشته است. در تحقیق حاضر با هدف تولید hbeag نوترکیب به همراه برچسب هیستیدینی، بخشی از ژن hbeag که دقیقا مطابق با توالی کد کننده آنتی ژن موجود در خون بیماران مبتلا بود، جداسازی و در وکتور pqe-30 کلون گردید. این وکتور برچسب6x his را به انتهای آمینی پروتئین مورد نظر متصل می کند. وکتور نوترکیب حاصل جهت تایید صحت ساختار، تحت برش با آنزیمهای محدود کننده قرار گرفت و سپس به سلولهای e.coli m15 ترانسفورم گردیده و جهت بیان پروتیین، القای شیمیایی با iptg انجام شد. پس از انجام عمل تلخیص، نتایج sds-page، elisa و وسترن بلاتینگ نشان داد که hbeag نوترکیب به دست آمده، خواص کامل آنتی ژنتیک hbeag که بطور فیزیولوژیک در خون بیماران مشاهده می شود را داراست و افزوده شدن اپی توپهای his-tag نه تنها اثری بر روی این خصوصیات نداشته است بلکه کاربرد این برچسب امکان استفاده از کروماتوگرافی جذبی با ni-ntaو تخلیص آسان و یک مرحله ای پروتیین را فراهم می کند. این پژوهش یک ساده و کارامد را برای تهیه hbeag نوترکیب به میزان زیاد و خلوص بالا برای کاربرد های تشخیصی و تحقیقی در باب فیزیولوژی و پاتوژنز این آنتی ژن معرفی می کند.
منابع مشابه
تخلیص و ارزیابی HBeAg نوترکیب به همراه بر چسب هیستیدینی با ساختار فیزیولوژیک طبیعی، به دنبال کلونینگ و بیان آن در E.coli
متن کامل
مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure
کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون tsh انسانی (tshβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
سابقه و هدف: اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (tsh) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های ria و elisa برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین tsh و سه هورمون گلیکوپروتئینی lh, fsh و cg شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین، در پژوهش حاضر سعی بر آن است که زیر واحد بتا tsh، تولید شده و از نظر آنتی ژنیسته مورد بررسی قرار می گیرد. مواد و روش ...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25
Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص فیتاز تغییریافته اشرشیاکلی
هدف: فیتازها گروهی از فسفاتازها هستند که قادر به هیدرولیز فیتیک اسید میباشند. فیتازها با تجزیهی فیتات قادر به کاهش یا حذف اثرات مخرب فیتات هستند. فیتاز اسیدی و مقاوم دمایی همراه با تولید بالا و خالص و البته یک سیستم نسبتاً ارزان دارای کاربرد در مقیاس وسیع میباشد. لذا در این مطالعه با تغییراتی در توالی آنزیم، تولید فیتاز نوترکیب با طول کمتر و میزان بیان بیشتر مورد بررسی قرار گرفت. مواد و رو...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
physiology and pharmacologyجلد ۸، شماره ۲، صفحات ۱۲۵-۱۳۶
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023